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構建穩定細胞株如何滿足實驗要求
點擊次數：412 發布時間：2023-01-14
通過選擇法或克隆形成法從原代培養物或細胞系中獲得具有特殊性質或標志物的培養物稱為耐藥細胞株，原代培養的細胞一般傳至10代左右就不容易傳下去了，細胞的生長就會出現停滯，大部分細胞衰老死亡。但是有極少數的細胞能夠度過“危機”而繼續傳下去，這些存活的細胞一般能夠傳到40--50代，這種傳代細胞叫做細胞株。構建穩定細胞株而不是瞬時轉染更能滿足實驗要求：
1)，外源片段在分裂細胞中長期(>2周)穩定表達。雖然普通轉染實驗一般只能保證2-4天的轉染和表達效率，但腺病毒載體在多數分裂細胞中可以維持2-4周內的高轉染效率和表達周期。而非分裂細胞，可以使用腺相關病毒載體轉導外源基因，因為腺相關病毒載體在許多非分裂細胞中可以保持長達1年的高效表達。
2)，需要構建使用誘導表達系統，這主要是由于：a)，過表達基因或者干擾目的基因引起細胞毒性或者抑制細胞生長等不利因素;b)，目的基因的過表達或者干擾需要時空特異性。
3)，希望控制目的基因過表達或者干擾的拷貝數，以避免引入人為因素影響實驗結果的精確性。構建穩定株可以幫助篩選拷貝數適量的細胞進行實驗研究。
4)，部分細胞種類，病毒載體亦無法達到高轉導效率，通過構建穩定株，達到外源片段的高效表達。
5)，長期在少數幾類細胞中研究幾個基因的功能，通過構建穩定株，可以大大降低頻繁轉染或者病毒包裝的成本，也極大方便實驗研究。
6)，部分蛋白穩定性強，瞬時RNA干擾因為作用周期短，只能抑制目的基因的表達，但無法去除已經表達的目的蛋白，所以需要通過構建穩定株實現更好的基因干擾效果。
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